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鏈霉素
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗鏈霉素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物鏈霉素的含量。
二、試劑盒特性
雞 肉 ·············································· 1 ppb
雞肝、牛奶 ······································ 4 ppb
蜂 蜜/蜂王漿 ··································· 2 ppb
鏈霉素 ·········································· 100%
慶大霉素 ······································· ﹤0.1%
雙氫鏈霉素 ···································· 108%
卡那霉素 ······································· ﹤0.1%
牛 奶 ···································· 85±22%
雞肉組織 ···································· 80±22%
蜂蜜/蜂王漿 ······························ 75±22%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.1ppb |
0.4ppb | 1.6ppb | ||
6.4ppb | 25.6ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 12ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 10X濃縮復(fù)溶液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、恒溫水浴鍋
微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:氫氧化鈉、乙腈、正己烷、三氯yi酸
五、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 0.5%三氯yi酸溶液
取0.5g三氯乙suan加去離子水定容100ml。
配液2 3%三氯乙suan溶液
取3g三氯乙suan加去離子水定容100ml。
配液3 1M NaOH溶液:
稱4g NaOH加去離子水定容至100ml。
配液4 0.1M NaOH溶液:
稱0.4g NaOH加去離子水定容至100ml。
配液5 樣本復(fù)溶液:
將10X濃縮復(fù)溶液用去離子水1:9稀釋。
(a)牛奶處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 40倍
(b)雞肉處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 10倍
(c)雞肝處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 40倍
(d)蜂蜜、蜂王漿處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 10倍
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含鏈霉素量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.1ppb為1.816;0.4ppb為1.415;1.6ppb為0.74;6.4ppb為0.313;25.6ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是6.4ppb~25.6ppb;樣本2的濃度范圍是0.4ppb~1.6ppb,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第-個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以鏈霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。